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对于方舟子的质疑,韩春雨做出这样的回应

2017-10-26 17:51 来源:www.ejingxi.com 作者:靖西旅游资讯

关键词:方舟子,韩春雨

对于/p方舟子的质疑,韩春雨做出这样的回应

韩春雨团队和他们的NgAgo-gDNA技术自第一次被报道,就一直倍受关注,近日,方舟子公开发文质疑韩春雨"诺奖级"实验成果的可重复性问题,(推荐阅读:方舟子发文质疑韩春雨“诺奖级”实验成果,你怎么看?)而对于方舟子和部分网友的质疑,韩春雨也于7月2日在百度贴吧上做出了回应。

早前,韩春雨一经报道,就有细心的人在贴吧上找出了韩老师。(邮箱已暴露了身份)

对于方舟子的质疑,韩春雨做出这样的回应

而此次韩春雨老师的回复是其在"国际米兰吧"上的回帖。网友"第十三米的阳光"引用方舟子的文章《河北科技大学韩春雨"诺贝尔奖级"实验的重复性问题》中的内容在该贴吧内发帖。(http://tieba.baidu.com/p/4645810480?pid=93027569268&cid=0&from=prin#93027569268)

对于方舟子的质疑,韩春雨做出这样的回应

对于方舟子的质疑,韩春雨做出这样的回应

韩春雨老师用自己的"槐北路"的账号进行了回复

对于方舟子的质疑,韩春雨做出这样的回应

 

对于方舟子和网友们提出的质疑,韩春雨在该回复里进行了详解解答:

质疑1.:图片3:有人能重复(FACS和Western Blot),但那有可能是假阳性。

韩春雨的回复:细胞做好检测,不要有寄生菌污染,不要有支原体污染(Ago系统对污染特别敏感---特别是单转guide假阳性---我非常确定在没有污染的情况下,单转guid不会影响GFP表达,假阴性也大多因为细胞污染,假阳性和假阴性我都遇到过,国内买的细胞我就不吐槽了),转染用的质粒质量要好(可用30ngGFP转细胞,若是均一且效率高表明质量好,强弱不均一则表明质量差,越不均一表明质量越差),guide磷酸化完全(没有磷酸化不能load和切割---谢谢印证我的Fig2结果,至于怎么检测,自己跑个PAGE看看---)

质疑2. 目前还未见有人反映重复出了图4结果。

韩春雨的回复:Fig4,也是几乎惟一算是有难度的,就是控制转染时的细胞密度和用血清控制细胞生长,时间稍长,毕竟NgAgo未经过系统的密码子优化---照着online method上protocol for genome editing and T7E1做(小经验,PCR最好不要有引物二聚体,如果引物二聚体多请重设引物;PCR产物直接回收最好不跑胶回收,可能跟ago切24bp有关,设好对照!)---银染分辨率高,可以排除T7E1假阳性,能做出预期条带后请用PCR产物去测序。欢迎大家广泛使用此系统,并分享成功经验和失败教训。附,addgen上的质粒,可以直接用作基因组编辑。再次强调,不加NgAgo,就能抑制GFP,是假阳性,是细胞出问题了(谢天谢地不但我自己而且审稿人也有这个对照)出现假阳性的细胞切基因组就没戏了。对于Fig4,若是不习惯做银染,也可以直接做KI:doner 用GFPcoden+polyA signal,前后加几个保护性的碱基---从GFP-N1扩出来连到T-vector上,再从此doner-Tvector上扩(防止GFP-N1污染的假阳性)出来纯化,500-800ng共转(for each well of 24 well plate)。

而对于韩春雨的回复,方舟子也做出了回应:

那么这种"高超的实验技术"究竟是不是实验细节的处理,不同网友也有自己的看法,有网友表示pcr已经有那么久的历史,且机器已经半自动化,但目前也不是每个人次次都能成功。在实验过程中,技术不难,难的是整个实验过程都不能有半点差错。韩春雨老师经过几年发表出来的结果,而目前大部分实验室也只刚刚尝试几个月。关键一步都没处理好,所以做不出来,但是恰恰是关键的一步 这也是他能做出来成果,别人做不出的原因。

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